產品詳情:
利用流式細胞分選儀,以高能量激光照射高速流動狀態下被熒光色素染色的單細胞或微粒,測量其產生的散射光和發射熒光的強度,從而對細胞(或微粒)的物理、生理、生化、免疫、遺傳、分子生物學性狀及功能狀態等進行定性或定量檢測的一種現代細胞分析技術,它可根據發射光的熒光強度和波長將發光顆粒亞群分開并可實現免疫細胞亞群分選、腫瘤干細胞分選、造血干細胞分選、GFP陽性細胞分選、側群SP細胞分選等,得到高活性、高純度的目標細胞,繼續無菌培養,或用于下游PCR、RNA-Seq、FISH等實驗。
送樣要求
組織類型 | 詳細要求 |
單細胞懸液 | 細胞直徑<40 μm、細胞活性>60%;無結團和碎片,細胞密度不超過1×107/ml |
全血 | 全血樣本在送樣前應充分與抗凝劑混合,確認血樣沒有溶血或凝結,并盡快安排實驗 |
其他組織 | 送樣前先以無菌PBS清洗后再無菌條件下充分剪為碎塊,依據組織類型選擇合適的完全培養液低溫運輸 |
實驗流程
獲取細胞懸液→熒光抗體染色→調整細胞濃度(如HUH7, 建議300-400w/ml)→過濾細胞→移入流式管→避光置冰上運至分選室→上機檢測并設定分選條件→分選細胞→上機回測,檢測純度。
注:分選前的細胞一定要過濾過(一般用300目濾網),否則會堵機器的。
流式抗體的選擇
(1)選擇熒光時首先應確認能被流式細胞儀上所配置的激光激發;
(2)激發光譜必須在儀器上濾光片能夠接受的合適范圍內;
(3)盡量使用已經用熒光素標記好的單克隆抗體;
(4)如果是單色實驗,熒光素的亮度越強越好;
(5)如果是多色實驗,除了避免使用光譜高度重疊的熒光素外,還應搭配染色指數。簡單來說,就是用亮度強的熒光素標記抗體水平低的抗原,而用較弱的熒光素標記抗體水平高表達的抗原。
抗體需要客戶提供嗎?
本公司備有biolegend和BD的常用流式抗體
哪些情況下必須用流式細胞儀來進行細胞分選?
(1)要求目標細胞群有極高的純度(95%-100%);
(2)需要分選低密度表面受體/抗原的細胞(弱陽性細胞);
(3)需要根據表面受體密度的差別來分離不同細胞(根據免疫表型的分選、抗體親和力進化等);
(4)需要依據多色熒光標記來分選細胞;
(5)根據某些細胞內部標志,如DNA含量、包內抗原等分離細胞;
(6)多孔板分選。如96孔板或384孔板中精確的分選出1個細胞;
(7)分選含量極低的細胞(0.001%或更低),流式可分選出百萬分之一的稀有細胞。
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